沙丁胺醇快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

沙丁胺醇快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
一、原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物沙丁胺醇將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗沙丁胺醇抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物沙丁胺醇的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物沙丁胺醇的含量。
二、試劑盒特性
u 試劑盒靈敏度：   0.1ppb
u 孵育溫度：       25℃
u 孵育時(shí)間：       30min～15min
u 樣本檢測(cè)下限
尿     樣        ······························· 0.1ppb
組 織（處理法一） ····························· 0.4ppb
組 織（處理法二） ····························· 0.1ppb
飼      料      ·······························  1ppb
u 交叉反應(yīng)率
沙丁胺醇（Salbutamol ）·······················  100%
特普他林（Terbutalin）   ·····················  <1%
克倫特羅（Clenbuterol）  ·····················  <1%
萊克多巴胺（Ractopamine）············ ······· <0.1%
u 樣本回收率
尿     樣   ·······························  95%±17%
組     織   ·······························  75%±22%
飼     料   ·······························  80%±18%
三、試劑盒組成

1	微量測(cè)試孔	每條8孔，一板12條
2	標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶 （1ml/瓶）	0ppb	0.1ppb
		0.3ppb	0.9ppb
		2.7ppb	8.1ppb
3	酶標(biāo)記物	7ml	紅色帽
4	抗體工作液	10ml	藍(lán)色帽
5	底物A液	7ml	白色帽
6	底物B液	7ml	黑色帽
7	終止液	7ml	黃色帽
8	20X濃縮洗滌液	40ml	白色帽
9	20×樣本提取液	50ml	透明帽

四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱、打印機(jī)
微量移液器：?jiǎn)蔚?nbsp;20～200μl、單道100～1000μl、多道 30～300 μl
試      劑：乙酸乙酯、乙腈、氫氧化鈉、濃鹽酸、甲醇、無(wú)水硫酸鈉、正己烷
五、樣本前處理步驟
u 樣本處理前須知
（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。
（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
u 樣本前處理需配制：
配液1  0.1M HCl 溶液
取0.86ml濃HCl加水定溶至100ml。
配液2  0.1M NaOH 溶液
稱(chēng)取0.4g NaOH加水定溶至100ml。
配液3  乙腈-0.1M HCl 溶液
        V_乙腈：V_HCl =84：16。
配液4  樣本提取液
        1份20×樣本提取液 + 19份去離子水混合均勻后用于組織樣本提取。
u 樣本處理：
（a）尿樣本的處理方法
取20μl清亮尿樣直接測(cè)定（如果尿樣渾濁一定要過(guò)濾或4000r/min離心10min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。
樣本稀釋倍數(shù):  1倍
（b）組織樣本的處理方法一
1、 稱(chēng)2±0.05g均質(zhì)后的組織至50ml離心管中，加入6ml稀釋后的樣本提取液，充分振蕩2min，室溫4000r/min以上離心10min(注：若組織樣本中油脂含量較高，可在振蕩后放入85℃水浴10min后再離心)；
2、 取20μl上層液進(jìn)行分析。 
樣本稀釋倍數(shù):  4倍 
（c）組織樣本的處理方法二
1、 稱(chēng)取 2 ± 0.05g 均質(zhì)后的組織于50ml離心管中，加入6ml乙腈-0.1MHCl，振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min；
2、 取上清3ml，加入2ml 0.1M NaOH，加入6ml乙酸乙酯，振蕩1min，室溫4000r/min 以上離心10min。取全部上清于50～60℃氮?dú)饬骰蚩諝饬鞔蹈桑?br> 3、 加入1ml稀釋后的樣本提取液溶解干燥后的殘留物，混合30s；
4、 取20 μl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：  1倍  
（d）飼料處理方法
1、 稱(chēng)1.0±0.05g研碎的飼料樣品于50ml離心管中，加入10ml甲醇，再加入5g無(wú)水硫酸鈉，充分振蕩2min；15℃ 4000r/min以上離心10min；
2、 吸出離心后的上清液1ml，于50～60℃氮?dú)饬骰蚩諝饬鞔蹈桑? ml稀釋后的樣本提取液溶解干燥后的殘留物，再加入1ml正己烷混合30s ；15℃ 4000r/min以上離心5min；去除上層有機(jī)相；
3、 取下層20 μl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：10     
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
u 測(cè)定前應(yīng)須知：
1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、 使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、 在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
4、 所有恒溫孵育過(guò)程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。
u 操作步驟：
1、 從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
4、 編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本20μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入80μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。
6、 將孔內(nèi)液體甩干，用稀釋的洗滌液250μl/孔洗板4～5次，每次間隔15～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7、 顯色：加入底物A液50μl/孔，再加入底物B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
8、 測(cè)定：加入終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，5min內(nèi)讀數(shù)），測(cè)定每孔OD值。
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含沙丁胺醇量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.1ppb為1.816；0.3ppb為1.415；0.9ppb為0.74；2.7ppb為0.313；8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb～8.1ppb；樣本2的濃度范圍是0.3ppb～0.9ppb，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中沙丁胺醇實(shí)際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即

百分吸光率（%）＝	B	×100%
	B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B₀—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中沙丁胺醇實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索取）
八、 注意事項(xiàng)
1、 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化；不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期
1、 儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2～8℃保存，不要冷凍。
2、 保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。
提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)放心使用。
 
需要更詳細(xì)的產(chǎn)品信息請(qǐng)聯(lián)系研謹(jǐn)生物客服.